眼科手術(shù)顯微鏡的發(fā)展需要?jiǎng)?chuàng)新精神

 　　眼科手術(shù)顯微鏡作為奧林巴斯顯微鏡的一種類型，是*，從80年代末期才開始發(fā)展的。
 
　　眼科手術(shù)顯微鏡的原理是利用激光掃描束通過(guò)光柵針孔形成點(diǎn)光源，在熒光標(biāo)記標(biāo)本的焦平面上逐點(diǎn)掃描，采集點(diǎn)的光信號(hào)通過(guò)探測(cè)針孔到達(dá)光電倍增管（PMT），再經(jīng)過(guò)信號(hào)處理，在計(jì)算機(jī)監(jiān)視屏上形成圖像。
 
　　對(duì)于物鏡焦平面的焦點(diǎn)處發(fā)出的光在針孔處可以得到很好的會(huì)聚，可以全部通過(guò)針孔被探測(cè)器接收。而在焦平面上下位置發(fā)出的光在針孔處會(huì)產(chǎn)生直徑很大的光斑，對(duì)比針孔的直徑大小，則只有極少部分的光可以透過(guò)針孔被探測(cè)器接收。
 
　　而且隨著距離物鏡焦平面的距離越大，樣品所產(chǎn)生的雜散光在針孔處的彌散斑就越大，能透過(guò)針孔的能量就越少，因而在探測(cè)器上產(chǎn)生的信號(hào)就越小，影響也越小。正由于共焦顯微僅對(duì)樣本焦平面成像，有效的避免了衍射光和和散射光的干擾，使得它具有比普通顯微鏡更高的分辨率，并在生物學(xué)中獲得了廣泛的應(yīng)用。
 
　　激光共焦顯微鏡使用方便，與一般光學(xué)顯微鏡相似，且全部采用計(jì)算機(jī)直觀控制。基本無(wú)須制樣，不損傷樣品。不需要做導(dǎo)電處理，也容許大尺寸樣品直接觀察，*不破壞樣品。幾十秒到一兩分鐘即完成全部的掃描，成像，測(cè)量采樣工作。
 
　　眼科手術(shù)顯微鏡脫離了傳統(tǒng)光學(xué)顯微鏡的場(chǎng)光源和局部平面成像模式，采用激光束作光源，激光束經(jīng)照明針孔，經(jīng)由分光鏡反射至物鏡，并聚焦于樣品上，對(duì)標(biāo)本焦平面上每一點(diǎn)進(jìn)行掃描。
 
　　組織樣品中如果有可被激發(fā)的熒光物質(zhì)，受到激發(fā)后發(fā)出的熒光經(jīng)原來(lái)入射光路直接反向回到分光鏡，通過(guò)探測(cè)針孔時(shí)先聚焦，聚焦后的光被光電倍增管（PMT）探測(cè)收集，并將信號(hào)輸送到計(jì)算機(jī)，處理后在計(jì)算機(jī)顯示器上顯示圖像。在這個(gè)光路中，只有在焦平面的光才能穿過(guò)探測(cè)針孔，焦平面以外區(qū)域射來(lái)的光線在探測(cè)小孔平面是離焦的，不能通過(guò)小孔。
 
　　因此，非觀察點(diǎn)的背景呈黑色，反差增加，成像清晰。由于照明針孔與探測(cè)針孔相對(duì)于物鏡焦平面是共軛的，焦平面上的點(diǎn)同時(shí)聚焦于照明針孔與探測(cè)針孔，焦平面以外的點(diǎn)不會(huì)在探測(cè)針孔處成像，即共聚焦。以激光作光源并對(duì)樣品進(jìn)行掃描，在此過(guò)程中兩次聚焦，故稱為激光掃描共聚焦顯微鏡。
 
　　奧林巴斯激光共焦顯微鏡從產(chǎn)生至今不斷的追求發(fā)展，顯微鏡的光源設(shè)計(jì)和分光采集技術(shù)也有較大的改進(jìn)，主要集中在如下幾個(gè)方面：
 
　　現(xiàn)代的眼科手術(shù)顯微鏡可以根據(jù)研究需要選擇不同的激光器。選擇激光光源時(shí)，一方面要滿足研究工作對(duì)波長(zhǎng)的需求，另一個(gè)方面要考慮到激光光源的壽命。一代激光共焦顯微鏡可以用棱鏡狹縫分光的新技術(shù)，配上合適的激光源后，能夠擺脫傳統(tǒng)的波長(zhǎng)濾片組的限制，連續(xù)和自由地選擇波長(zhǎng)。顯微鏡的物鏡也做了較大的改進(jìn)，不但具有平場(chǎng)復(fù)消色差特性，而且能與高速掃描功能相匹配。